关于《化妆品中微生物检验方法总则》等7项方法的问答

针对国家药监局近日发布的《国家药监局关于将〈化妆品中微生物检验方法总则〉等7项方法纳入化妆品安全技术规范的公告》（2026年第105号），中国药品检定研究院起草相关问答，具体内容如下：

（一）本标准的修订背景是什么？

近年来，我国化妆品产业快速发展，连续三年市场规模突破万亿元，产品剂型日益丰富，防腐体系日趋复杂。现行《化妆品安全技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》）中原微生物检验方法总则缺少培养基质量评价及方法适用性试验要求，无法有效评估化妆品中防腐成分的抑菌作用，易造成假阴性结果导致污染产品漏检。为保障化妆品质量安全，有必要对原检验方法进行修订。

此次修订参考了ISO、USP等国际标准，新增培养基的质量控制要求，建立微生物检验方法适用性试验程序，补齐技术管控短板，保障检验结果可靠性，实现技术要求与国际接轨，为化妆品微生物控制提供坚实技术支撑。

（二）本标准主要修订了哪些内容？

相较于原微生物检验方法总则，主要修订以下内容：

一是新增实验室基本要求（见“2 实验室基本要求”），从环境、人员、设备、检验用品、菌株管理五个方面进行系统规定，明确洁净区域、BSL-2实验室及人员资质要求，从源头保障检验规范性。

二是新增培养基质量评价要求（见附录D），规定每批次开展促生长能力、抑制能力和生化特性三项评价，建立参比培养基制度，解决培养基批间差异问题，保障结果可比性。

三是新增方法适用性试验要求（见“4.4 方法适用性试验”及附录E），分别规定定量和定性检验的适用性试验方法，明确稀释、中和剂、薄膜过滤等抑菌成分消除途径，避免防腐剂导致假阴性。

四是新增生物安全与质量控制要求（见“6 生物安全与质量控制”），明确对照试验设置和人员考核要求，规范过程质量控制。

五是新增检验后样品处理要求（见“7 检验后样品处理”），明确致病菌样品无害化处理，规范样品处置流程。

六是完善标准附录体系，系统收录培养基配方并新增设备清单、染色规程、质控要求、适用性规程、推荐菌株等附录，增强可操作性。

（三）本标准的实施对行业有什么影响？

本标准为化妆品微生物检验工作提供了统一、规范的技术依据。修订后的微生物检验方法总则补齐了培养基质量评价和方法适用性试验等技术管控短板，有效解决了因培养基质量差异和样品抑菌性导致的假阴性问题，显著提升了检验结果的准确性和可靠性。同时，通过细化实验室环境、人员资质、生物安全及菌株管理等要求，进一步规范了检验机构和企业实验室的质量管理体系，有助于提升行业整体检验能力和生物安全水平。本标准的实施，将进一步完善化妆品微生物检验标准体系，强化微生物污染风险防控，为保障公众用妆安全提供技术支撑。

（一）本标准主要修订了哪些内容？

本标准规定了化妆品中菌落总数检验的操作规范、计数方法及报告要求，与《规范》中原方法相比，主要修订了以下四个方面内容：

一是增加了质控菌株使用要求，明确了3株推荐质控菌株信息，作为方法适用性试验和检验过程中的质量控制中使用的菌株。

二是操作步骤中增加了薄膜过滤法，明确薄膜过滤法可通过调整冲洗液用量、使用含中和剂的稀释液等方式更有效地消除样品的抑菌性。

三是结果与报告部分增加了薄膜过滤法的规则，规范薄膜过滤法的计数方法和结果报告规则。

四是优化了检验中显色剂氯化三苯四氮唑的使用浓度，提高化妆品菌落总数计数的准确性，保证检验结果的真实性。

（二）本标准的实施对行业有什么影响？

新修订的检验方法通过强化前处理、方法适用性与质量控制，能更真实反映产品微生物污染水平。新方法统一后检验数据更加可靠，将为化妆品注册备案、抽样检验等安全监管提供更加有力支撑。同时，新方法可满足儿童、眼唇等风险相对较高产品严格限量的要求，提升检测结果的准确性，支撑差异化风险管控，切实保障消费者安全。新标准的实施将促进企业提升化妆品生产卫生控制水平。

（一）本标准主要修订了哪些内容？

本次修订主要对检验流程进行了优化。主要修订内容包括：

一是优化发酵培养流程，将原方法中的一步发酵调整为两步发酵。《规范》中原方法采用一步发酵法，样品稀释度低且培养温度高，存在一定的基质效应。修订后的两步发酵法，先在36±1℃进行初发酵使大肠菌群复苏，再取培养物于44.5±0.5 ℃进行复发酵，有效降低了基质效应，提高了方法的灵敏度。

二是取消靛基质试验判定步骤，使判定标准更加符合耐热大肠菌群“在44.5 ℃培养24～48 h能发酵乳糖产酸并产气”的定义。

三是增加方法适用性描述，规范方法验证流程。本标准结合微生物检验方法总则的要求，增加了方法适用性描述，有条件的机构和企业可以通过方法适用性验证结果确认检测方法的准确性。

四是增加“附录B 推荐质控菌株信息表”。附录B推荐了质控菌株，旨在保障检验方法和实验操作的有效性。

（二）本标准的实施对行业有什么影响？

本标准的修订有利于统一化妆品中耐热大肠菌群的检验方法，提升检验结果的准确性和一致性。一方面，本标准修订了发酵流程，提高方法灵敏度，减少假阴性；同时优化了判定方法，降低企业的检验成本。另一方面，本标准结合微生物检验方法总则加入方法适用性描述，与国际接轨，规范方法适用性的操作流程，企业可以通过方法适用性结果验证检测结果的准确性，有助于加强产品质量管理和保障消费者安全。

（一）本标准主要修订了哪些内容？

本标准与《规范》中原金黄色葡萄球菌的检验方法相比，主要修订了以下四个方面内容：

一是延长增菌培养时间。对标ISO等国际标准，在经充分验证后，将SCDLP液体培养基或7.5%氯化钠肉汤培养基的培养时间从24 h修改为24～48 h，旨在提高方法灵敏度，延长的时间对检验总体时间无影响。

二是增加鉴定方法。在原有方法的基础上增加生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统对金黄色葡萄球菌进行鉴定，旨在提供多样化的鉴定方法，供实验室按需选用。

三是增加必要时进行方法适用性试验的要求。主要为培养基稀释法，旨在确保结果的准确性和可靠性，具体方法在微生物检验方法总则中体现。

四是增加“附录B 推荐质控菌株信息表”。附录B推荐了质控菌株，旨在保障检验方法和实验操作的有效性。

（二）本标准的实施对行业有什么影响？

本标准为化妆品中金黄色葡萄球菌的检验工作提供了权威统一的方法依据。修订的检验方法提升了方法灵敏度，消除了假阴性风险，增加了质量控制要求，完善了微生物检验方法标准体系。本标准的实施，将进一步强化微生物污染风险控制，保障化妆品的质量安全。

（一）本标准主要修订了哪些内容？

本标准与《规范》中原霉菌和酵母菌总数的检验方法相比，主要修订了以下五个方面内容：

一是修改了计数培养基的名称和配方，将原“孟加拉红培养基”修改为“卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基”。在培养基中增加了中和成分，与化妆品其他微生物检查方法保持一致，更有利于消除化妆品中防腐成分的抑菌性，从而提高计数结果的准确性。

二是修改了培养温度范围，经充分的比较和试验验证后，将原“28±2 ℃”修改为“25±1 ℃”，在不影响微生物生长的前提下，可延缓菌落蔓延，更有利于结果观察和计数。

三是在计数方法中新增“薄膜过滤法”。对于部分化妆品，采用含中和剂的培养基和扩大稀释倍数等方法无法有效消除其防腐成分的抑菌性，按照微生物检验方法总则附录E开展方法适用性试验并确认后，可采用“薄膜过滤法”进行霉菌和酵母菌总数的检验。

四是修改了适宜的菌落计数范围，参考ISO 16212:2017方法，将霉菌和酵母菌的适宜计数范围由“5～50 CFU”修改为“15～150 CFU”，以减少随机误差对计数结果的影响。

五是在附录B 中增加了推荐质控菌株信息表，用于方法适用性试验，旨在保障检验方法的有效性。

（二）本标准的实施对行业有什么影响？

本次霉菌和酵母菌总数检验方法的修订，通过优化培养基配方、调整培养温度、新增薄膜过滤法、完善计数范围及质控菌株相关要求，进一步提升检验方法的科学性与适用性，减少因化妆品防腐体系带来的假阴性结果，降低菌落蔓延、随机计数误差等对检测结果的影响，更有效识别化妆品真菌污染风险。

（一）本标准的制定背景是什么？

洋葱伯克霍尔德菌群（Burkholderia cepacia complex）为化妆品中高发的条件致病菌，可对免疫力低下人群造成严重健康危害。国内化妆品风险监测结果显示，该菌群在化妆品产品中有检出，存在污染风险，对化妆品质量安全和消费者健康构成潜在威胁。目前，现行《规范》中尚未建立专属的化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检验方法。为完善化妆品微生物安全防控技术体系、补齐高危致病菌监管标准短板，进一步规范检验方法、提升化妆品安全监管的科学性与规范性，亟需制定化妆品专属的洋葱伯克霍尔德菌群检验方法。

（二）本标准规定的主要内容有哪些？

本标准规定了化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检验方法，主要包含以下三个方面要求：

一是规定增菌培养要求，选用SCDLP液体培养基作为增菌培养基，经验证能够有效富集样品中低载量的洋葱伯克霍尔德菌群，提升方法的检出能力，避免漏检情况发生。

二是规定分离培养要求，采用洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂培养基（BCSA），在36±1℃条件下培养48～72h，依据菌落特征筛选可疑菌落，实现目标菌群与杂菌的有效分离，保障后续鉴定工作的准确性。

三是规范菌株鉴定的技术要求，明确染色镜检、过氧化氢酶试验、赖氨酸脱羧酶试验、枸橼酸盐利用试验四项生化鉴定试验，同时允许使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统作为替代检测方式，适配不同层级实验室的检测条件，提升方法通用性。

此外，本标准明确检验仅需鉴定至菌群水平即可满足监管要求，如需进一步细分菌种，可采用分子生物学技术开展补充鉴定，兼顾了日常检验的实操性与科研溯源的技术拓展性。

（三）本标准的实施对行业有什么影响？

本标准的实施填补了化妆品行业洋葱伯克霍尔德菌群检验方法的空白，进一步完善了行业微生物检验技术体系。本标准统一了化妆品样品增菌、分离及鉴定的全流程操作规范，解决了以往行业检验方法不统一、检测结果不可比对的问题，有效规范生产企业自检与检验机构检测工作。同时引导企业强化生产全过程微生物风险管控，提升行业对洋葱伯克霍尔德菌群污染的风险防控能力。

（一）本标准的制修订背景是什么？

随着3R理念的发展和科学技术的进步，越来越多的替代方法被应用到化妆品安全性评价中。为促进我国化妆品标准与国际接轨，加快推动减少化妆品动物试验依赖，本标准主要参考OECD 2026年更新的指南TG 494 Vitrigel-EyeIrritancy Test Method for Identifying Chemicals Not Requiring Classification and Labelling for Eye Irritation or Serious Eye Damage，对方法在我国的可行性和适用性进行考察，研究转化OECD TG494指南。本标准可作为眼刺激性危害识别整合测试与评估策略的备选方法，是对现有眼刺激性评价标准的补充。

（二）本标准需要特别关注的内容有哪些？

1.本标准适用于单一成分的化妆品用化学原料的眼刺激性评价。

2.角膜上皮模型的构建：采用气-液界面培养方法构建角膜上皮模型，确保角膜上皮模型的跨膜电阻达到试验要求。

3.电阻仪：应执行标准中要求的量程和灵敏度，测量过程中，电极应保持稳定，确保测量过程满足试验要求。